β-1，3-1，4葡聚糖酶基因双拷贝工程菌杉的构建与发酵研究

作者: 裴红蕾 [1] ; 陈轶群 [1] ; 吕俊楠 [1] ; 杨雯涵 [1] ; 李志民 [1] ; 曹云鹤 [1]

关键词: β-1 3—1 4葡聚糖酶双拷贝毕赤酵母发酵

摘要：本试验旨在研究β-1，3—1，4葡聚糖酶双拷贝基因毕赤酵母工程菌株的构建及发酵。首先，通过对质粒pGAP—glu-opt进行PCR扩增获得密码子优化的β-1，3—1，4葡聚糖酶基因glu-opt，用EcoR I和Not I双酶切后与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接，获得重组质粒p9K—glu—opt。该重组质粒经Sac I线性化后转化毕赤酵母GS115菌株，利用不合组氨酸的MDS平板和摇瓶培养，筛选重组菌株，命名为GS115／9K-glu—opt。制备GS115／9K-glu-opt感受态细胞，再用线性化的重组质粒pPIC—glu—opt二次转化，在含有抗生素Zeocin的YPDS平板上筛选glu-opt基因双拷贝重组菌株GS115／2xglu—opt。双拷贝重组菌在10L发酵罐中进行高密度发酵培养及甲醇诱导表达，β－1，3—1，4葡聚糖酶最高酶活达到21600U／mL，约为单拷贝工程菌株X33／pPIC-glu—opt发酵活力的1．44倍；蛋白表达量达8．4g／L，约为X33／pPIC—glu—opt的1．68倍。

上一篇：白黎芦醇诱导的去乙酰化酶SIRT1高表达对猪卵巢颗粒细胞凋亡的影响
下一篇：不同添加水平稀土混合物对南江黄羊生长性能及血液指标的影响

β-1，3-1，4葡聚糖酶基因双拷贝工程菌杉的构建与发酵研究

作者: 裴红蕾 [1] ; 陈轶群 [1] ; 吕俊楠 [1] ; 杨雯涵 [1] ; 李志民 [1] ; 曹云鹤 [1]

关键词: β-1 3—1 4葡聚糖酶 双拷贝 毕赤酵母 发酵

关键词: β-1 3—1 4葡聚糖酶双拷贝毕赤酵母发酵