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猪新基因FAM134B的克隆及稳定干扰肌内前体脂肪细胞阳性克隆的筛选

作者: 袁章琴 [1] ; 任阳 [1] ; 汪以真 [1]

关键词: FAM134B基因 小干扰RNA 质粒转染 稳定筛选肌内前体脂肪细胞 猪

摘要:本实验旨在对猪新基因肼M134B基因进行全长克隆,尝试有效沉默FAM134B基因的干扰表达载体的构建和筛选.并筛选出沉默似M134B基因的稳定阳性细胞。设计合成3对嬲M134B基因的特异性发夹siRNA干扰片段,将其克隆入干扰载体pYr—1.1,构建可沉默删M134B基因的siRNA表达载体朋M134B-1、FAM134B-2和FAM134B-3,采用“pofectamineTM(Lip)2000介导质粒转染肌内前体脂肪细胞,通过实时荧光定量分析siRNA表达载体的干扰效果,并进一步用G418进行了稳定转染siRNA的肌内前体脂肪细胞筛选。结果表明:肼M134B基因的全长克隆成功,其siRNA表达载体构建正确,通过稳定筛选后,干扰效率较高的朋M134B-3表达载体和稳定转染硝M134B-3的细胞为构建筛选成功的siRNA表达载体和阳性细胞,干扰效率达65.0%。本研究成功克隆了新基因FAM134B的全长以及构建了有效沉默朋朋,34B基因表达的干扰载体,并筛选出了稳定沉默的阳性肌内前体脂肪细胞,为进一步研究础M134B基因在脂肪沉积中的功能研究奠定了基础。


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