兔IL-10重组基因表达及其亚细胞定位的研究

摘要：本研究旨在克隆新西兰白兔白细胞介素10（IL-10）基因的cDNA，并探讨其生物信息学功能，进一步通过增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。实验采用RT-PCR方法克隆兔IL-10基因的cDNA．初步进行生物信息学分析，构建含有EGFP报告基因的融合表达载体pEGFP-IL-10。脂质体（LTX）介导基因转染NIH-3T3细胞，48h后在荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布，RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。结果表明：实验成功克隆出免IL-JD基因537bp长的完整编码区（CDS），共编码178个氨基酸．GenBank登录号为NM001082045；IL-10蛋白的分子量为20．15ku，理论等电点为8．20；信号肽区域预测结果显示．IL-10蛋白含有一小段信号肽序列，属于分泌型蛋白，并且信号肽酶的切割位置在第21和第22个氨基酸之间；荧光倒置显微镜观察结果发现，融合蛋白在细胞质中表达，而转染pEGFP-C1后荧光蛋白均匀分布于整个细胞：RT-PCR检测mRNA表达明显。结果显示，融合表达栽体pEGFP-IL-10构建成功，并在细胞中明显表达，为进一步研究IL-10的生物学功能奠定基础。