淮南麻鸭IGF-I基因的克隆、序列分析及原核表达

摘要：本研究旨在分析淮南麻鸭，GF—I基因的结构特点以及获得编码的蛋白。根据GenBank数据库中鹅、鸡和鸭的IGF-I基因序列．设计1对引物P1／P2．利用RT—PCR方法克隆了淮南麻鸭的包含有编码区的部分IGF-I基因。将IGF-I编码区基因连接到原核表达载体pPROEXTMHTb，然后转化到感受态菌DH5d中，经终浓度为1．0mmol／L的IPTG诱导表达，IGF-I融合蛋白。结果表明：获得了534bp的淮南麻鸭IGF-I部分基因，经过生物信息进行序列分析，包括1个462bp的开放阅读框，可编码153个氨基酸，与鸭、鸡、人、绵羊、牛、野猪和大鼠的同源性分别达到99％、99％、84％、81％、83％、84％和78％；经SDS蛋白质电泳结果表明，成功获得分子量约27ku的IGF—I融合蛋白，纯化后经Western—blotting鉴定，可与兔抗人IGF—I抗体发生特异性免疫反应。