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徐淮山羊 Sox2 基因启动子的克隆及其活性的初步分析
作者: 韦光辉 [1] ; 朱睿 [1] ; 刘志永 [1] ; 邱峰龙 [1] ; 张振韬 [1] ; 陈庭锋 [1] ; 张亚妮 [1] ; 李碧春 [1] ; 曹文广 [2]
关键词: Sox2基因 启动子 活性分析 5-aza-2’-deoxycytidine诱导 山羊
摘要：本研究旨在确定徐淮山羊5022基因启动子区域，找出该基因启动子的核心调控区，初步探讨Sox2基因的表达调控机制。根据GenBank已公布的绵羊Sox2基因的启动子序列，设计特异性PCR引物扩增soz2基因的-系列启动子缺失片段，经酶切、测序及生物信息学分析，构建包含Sox2基因5’侧翼区-系列启动子缺失片段的pGL3-Sox2双荧光素酶表达载体，转染COS-7和GC1细胞，并进行5-aza-2’-deoxycytidine~导，检测不同片段的启动子活性。结果表明：徐淮山羊soz2基因5’侧翼区-1249-＋49bp区域的启动子活性最强（COS-7细胞），-1792-＋49bp区域活性最强（GCl细胞），-224～＋49bp区域为Sox2基因启动子基本活性区域。进一步研究发现，-484--109bp区域存在正调控元件，-755-484bp区域存在负调控元件。本实验通过构建包含Sox2基因启动子不同片段的重组报告基因载体并比较其转录活性，确定了soz2基因启动子的核心区域。另外，5～aza-2’-deoxvcytidine可以显著增强Sox2启动子的活性。为进一步研究Sox2基因的表达调控机制奠定了基础。
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