西农萨能羊脂肪分化相关蛋白（ADRP）基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

作者: 李芳 ; 罗军 ; 余康 ; 许会芬 ; 石恒波 ; 朱江江

关键词: ADRP 原核表达亲和纯化多克隆抗体羊

摘要：在大肠杆菌中表达西农萨能羊脂肪分化相关蛋白（ADRP）,并制备其多克隆抗体.以实验室保存的pMD 19-T-A DRP质粒为模板,扩增ADRP的CDS区,将其克隆到pET32a（＋）载体,阳性克隆转化到大肠杆菌菌株E.coli BL21 （DE3）中诱导表达,优化融合蛋白表达条件,使用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,纯化的ADRP蛋白经复性后免疫兔子制备多克隆抗体,ELISA和Western blot检测血清效价和特异性.结果表明：成功构建pET32a（＋）-ADRP原核表达载体并诱导其表达,获得最佳表达条件,即37℃、0.5 mmol/L IPTG诱导6 h;ELISA检测显示抗体效价达1∶64 000;经Western blot鉴定,制备的多克隆抗体能特异性结合原核表达以及乳腺上皮细胞表达的ADRP蛋白.本实验成功表达、纯化了ADRP融合蛋白,获得具高特异性、高效价的兔抗ADRP多克隆抗体.

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西农萨能羊脂肪分化相关蛋白（ADRP）基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

作者: 李芳 ; 罗军 ; 余康 ; 许会芬 ; 石恒波 ; 朱江江

关键词: ADRP 原核表达 亲和纯化 多克隆抗体 羊

关键词: ADRP 原核表达亲和纯化多克隆抗体羊