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SYBR Green I荧光定量PCR法检测转双基因猪pGH基因与IGF-1基因的表达
作者: 胡义洁 [1] ; 吴明明 [2] ; 朱艳菲 [1] ; 孙金海 [1]
关键词: 转双基因 猪生长激素基因 胰岛素样生长因子-1基因 实时荧光定量PCR
摘要：为确定猪生长激素基因（oGH）与胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在F0代保育期转双基因猪和同窝非转基因猪体内mRNA水平的表达差异情况，利用SYBR Green I Real—time PCR法检测精子介导纳米基因载体法获得的F0代2月龄转基因猪pG口基因与IGF-1基因的mRNA表达水平，根据荧光定量结果绘制熔解曲线和扩增曲线图谱，分析图谱并用F=（1＋E）^-△△Ct公式计算其相对表达量。结果表明：F0代转双基因猪pGGH基因的mRNA表达量是同期非转基因猪的1．2倍,IGF-1基因的mRNA表达量是同期非转基因猪的1．53倍,说明这2种外源基因均成功导入，并能在猪体内表达。本实验建立了能够稳定测评家猪生长激素与胰岛素样生长因子-1基因表达水平的方法，为进一步分析pGH—IGF-1生长轴对家猪生产性能的具体影响及转基因的实际应用提供了分子生物学方面的资料。