启动子和PolyA序列对水牛乳腺特异性表达载体表达效率的影响

摘要：为了获得能有效表达促乳素的乳腺特异性表达载体，本研究系统比较了不同长度的启动子和有／无PolyA序列对乳腺特异性表达载体表达标记基因绿色荧光蛋白（GFP）和目的基因促乳素（PRL）的影响。将不同载体瞬时转染Bcap37细胞后，分别用实时定量PCR和流式细胞仪检测PRL和GFP的表达水平。结果表明：长度为5．2kb的β-酪蛋白（Beta casein，BCN）启动子启动PRL的表达量显著高于长度为3.8kh启动子，前者的表达量约为后者的6倍；在BCN启动子长度均为5．2kh情况下，添加PolyA的载体p5．2BCN—PRL—PolyA—CMV—GFP—Neo组PRL的相对表达量为8．17，p5．2BCN—PRL—PolyA—CMV—GFP组PRL的相对表达量为17．84，均显著高于p5．2BCN—PRL—CMV—GFP—Neo组．可见添加PolyA后，PRL的表达量均显著增加；进一步比较发现，含PolyA的载体中GFP的表达水平也显著高于不含PolyA的载体。对比以上结果发现，添加PolyA能够有效解除启动子之间的转录干扰，使标记基因的启动子CMV和目的基因的启动子BCN均能顺利启动基因表达。经过优化的载体启动目的基因PRL表达的效率更高，可应用于下一步的研究工作中。