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苏禽黄鸡CVH基因真核表达载体构建及亚细胞定位
作者: 朱睿 ; 张振韬 ; 左其生 ; 刘志永 ; 韦光辉 ; 李东 ; 连超 ; 张亚妮 ; 李碧春
关键词: CVH基因 亚细胞定位 EGFP 间接免疫荧光 多克隆抗体 黄鸡
摘要：本研究通过PCR技术克隆苏禽黄鸡CVH基因的CDS区，分别构建真核表达载体pcDNA3．1-CVH和pEGFP—C1-CVH，并用pcDNA3．1-CVH载体免疫小鼠制备多克隆抗体。pcDNA3．1-CVH和pEGFP—C1-CVH分别转染COS一7细胞．进行间接免疫荧光实验和CVH—EGFP融合蛋白亚细胞定位．并通过RT—PCR、Westernblot进一步检测蛋白的表达。结果表明：克隆出CVH基因的完整CDS，构建了真核表达载体pcDNA3．1-CVH和pEGFP—C1-CVH，成功制备了多克隆抗体，转染后观察CVH基因表达产物定位于细胞质中，RT—PCR和Westernbolt分别检测到l989bp特异条带和100ku的融合蛋白。真核表达载体制备的多克隆抗体特异性良好，效价为1：200，CVH基因蛋白在细胞质中表达．为进一步探讨CVH基因的生物学特性建立基础。