猪和牛大麻素受体1和牛大麻素受体2真核表达载体的构建及在HEK293T细胞中的表达

摘要：构建含有myc标签和Kozak序列的猪大麻素受体1（pCNR1）、牛大麻素受体1（cCNR1）、牛大麻素受体2（cCNR2）真核表达载体。并在HEK293T细胞中进行表达。采用PCR方法，以猪、牛基因组DNA为模板分别扩增pCNR1、cCNRJ和cCNR2基因的编码区序列，用限制性内切酶Hindm和XbaI双酶切目的基因和真核表达载体pcDNA3．1（＋），并将双酶切的目的基因定向插入到真核表达载体pcDNA3．1（＋）中，经酶切和测序鉴定，测序鉴定正确的质粒加入Kozak序列和myc标签后，用脂质体法转染HEK293T细胞，用Westernblot检测pCNR1、cCNRJ和cCNR2的表达。结果表明：成功构建了pcDNA3．1（-4-）-myc／pCNR1、pcDNA3．1（＋）-myc／cCNR1和pcDNA3．1（＋）-myc／cCNR2的真核表达载体．通过Westernblot可检测到目的蛋白。结论表明pcDNA3．1（4-）-myc／pCNR1、pcI）NA3．1（＋）-myc／cCNR1和pcDNA3．1（＋）-myc／cCNR2真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达，为了解猪和牛的大麻素受体的药理学特性及其功能研究奠定实验基础。